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利用超纯水机制作的水在PCR试验中能发挥哪些作用

文章作者:超纯水机 发布时间:2020-09-24 16:15:22 浏览次数:0

  虽然现在新冠疫情已经得到了很好的控制,但是得新冠的患者一直都有,尤其是从国外入境的人员,入境后需要及时的做核酸检测,在做核酸检测的时候,常用的方法是PCR方法,而PCR对用水要求比较高,能够满足要求是利用超纯水机制作的超纯水,接下来我们将大家了解一下PCR和超纯水。

  一、什么是PCR技术?

  PCR技术又称为聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的特点是能将微量的DNA大幅增加。

超纯水机

  在新冠病毒检测中,核酸检测被定义为临床诊断的金标准,RT-PCR技术被反复提到,它是一种将RNA反转录和PCR相结合的技术。首先在反转录酶.的作用下,将提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下不断扩增(变性-退火-延伸多个循环)合成目的片段并进行分析。

  二、超纯水机在PCR中的作用

  PCR技术目前多搭配试剂盒使用,也有用户自行制备反应体系,无论哪个过程都需要使用水。无论是近年来季节性爆发的甲流乙流,还是目前全球都在经历的新冠病毒,在检测过程中都涉及一个痛点,那就是如何尽可能提高核酸检测的准确性,减少假.阴性结果出现的可能性。

  我们首先分析一下假阴性结果出现的原因,以新冠病毒核酸检测为例,假阴性的主要原因有:

  1病人病程:不同病程,患者体内病毒载量不同;

  2采样部位:咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采样部位病毒载量均不同;

  3采样准确性:拭子质量,工作人员操作等;

  4试剂盒的质量:引物设计以及水质控制。

  为了顺利将提取到的RNA反转录并实现DNA的成功扩增,一定要控制核糖核酸酶(RNases)的降解作用,如果试剂盒用水内含RNases,将极有可能导致假阴性结果的出现。

  三、去除RNases的主要方法

  1高压灭菌:即便是在180°C下高压灭菌4h之后,RNases仍保持某些活性,且某些细菌失活会释放更多的RNases;

  2 DEPC法(二乙基焦碳酸酯处理法) :利用二乙基焦碳酸酯(DEPC) 处理方法使酶失活是用来控制水溶液中RNases活性的常见方法。然而,二乙基焦碳酸酯是一种可疑致癌物,处理须小心;同时该方法虽然能够使酶失活,却无法将其从水中去除,同时清除多余的DEPC过程中,会产生乙醇,二氧化碳等其他污染物;

  3超滤法:超滤是一种能够从水溶液中清除RNases的方法。

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  四、超滤膜介绍

  超滤膜被大量用于水处理工程。超滤技术在反渗透预处理、饮用水处理、中水回用等领域发挥着越来越重要的作用。超滤技术在酒类和饮料的除菌与除浊,药品的除热原以及食品及制药物浓缩过程中均起到关键作用。

  超滤过滤孔径和截留分子量的范围一直以来定义较为模糊,一般认为超滤膜的过滤孔径为0.001-0.1微米,截留分子量(Molecular weigh cut-off, MWCO)为1,000-1,000,000 Dalton。严格意义上来说超滤膜的过滤孔径为0.001-0.01微米,截留分子量为1,000-300,000 Dalton。若过滤孔径大于0.01微米,或截留分子量大于300,000 Dalton的微孔膜就应该定义为微滤膜或精滤膜。

  一般用于超纯水水处理的超滤膜标称截留分子量为30,000-300,000 Dalton,而截留分子量为6,000-30,000 Dalton 的超滤膜大多用于物料的分离、浓缩、除菌和除热源等领域。

  上述内容中总结了利用超纯水机制作的水在PCR试验中能发挥哪些作用,纯水机是为数不多的一款安全过滤的水处理设备,它在处理的过程中,可以截留水里面的有害物质以及细菌,所以在医疗行业中用的比较多。

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